近日，中国农业科学院饲料研究所饲用酶工程团队研发出一种红色荧光蛋白偶联荧光激活细胞分选仪（FACS）的高通量筛选平台，首次利用里氏木霉表面展示的红色荧光蛋白作为筛选标记，通过流式细胞分选仪从突变体库中快速、准确的筛选高产突变菌株，一步获得高产纯系转化子。该方法大大提高了筛选效率，节约了成本，利于实际生产需要。相关研究成果发表在《生物燃料生物技术（Biotechnology for Biofuels）》上。
里氏木霉是一种能高效分泌纤维素酶的丝状真菌，在降解植物细胞壁多糖及相关应用上具有重要的价值。随着里氏木霉遗传体系的优化，如何筛选目的蛋白高效表达转化子成了问题的关键。传统的方法是对大量的转化子进行发酵，继而测定产酶活性，这种方法费时费力，而且很难对所有转化子进行鉴定，很容易把一些真正的高产菌株漏掉。因此建立一套高表达量纯系转化子快速筛选系统，可以有效加快丝状真菌的遗传改造进程，促进构建丝状真菌细胞工厂的发展。
该技术通过在细胞内表达红色荧光蛋白来建立红色荧光蛋白偶联荧光激活细胞分选仪的高通量筛选平台，使来自转录激活因子ace3和常温室压等离子体诱变的里氏木霉突变体库中的纤维素酶高产菌株可以快速分离。在里氏木霉细胞表面上展示红色荧光蛋白进一步改进该方法，使得能够分离影响除转录以外的调节阶段的具有有益遗传改变的菌株。该技术从农杆菌介导的随机插入突变体文库中成功分离了里氏木霉纤维素酶高产菌株，也可用于其他工业上重要的丝状真菌高产菌株的筛选。
该研究得到院科技创新工程、国家重点研发计划、国家自然科学基金等项目的资助。（通讯员 张帆）
原文链接：https://doi.org/10.1186/s13068-018-1264-z
